1. Applications

This kit can be used for rapid test of nitroimidazoles in honey and milk.

2. Cross reactions

Metronidazole.……………………………..…..…100%

Dimetridazole…………………………….…………..…216%

Ronidazole………………………………...….…….…….82%

Secnidazole.........................................................................20%

Ornidazole............................................................................18%

Tinidazole………….…………………...……...……….….<6%

3. Honey sample preparation method

------Weigh 3.0±0.05g of honey into a 50ml polystyrene centrifuge tube;

------Add 3ml of 0.1M carbonate buffer solution (solution 1), dissolve the honey sample completely;

------Add 9ml of ethyl acetate, shake for 5min, centrifuge for separation: 5min / 3000g / ambient temperature;

------Transfer 6ml of supernatant organic phase to 50ml polystyrene centrifuge tube, add 2ml of ethyl acetate and 2ml of 2M NaOH(solution 2), vortex for 5min;

------Centrifuge for separation: 5min / 3000g / ambient temperature;

------Transfer 4ml of supernatant organic phase to 10ml clean glass tube, dry under 50-60℃ water bath nitrogen gas;

------Add 1ml of nhexane, vortex for 30s, add 0.5ml of extraction solution(kit component), vortex for 1min, centrifuge for separation :  5min / 3000g / ambient temperature;

------Remove the supernatant organic phase, and take 50μl of the substrate solution for assay.

Milk sample preparation method, please reference the instruction

4. Assay Steps

9.2.1 Take all reagents out at room temperature (20-25℃) for more than 30min. Shake gently before use. Notice: The antibody solution should be stored at 4℃, which will be used immediately after taking out.

9.2.2 Get the microwells needed out and return the rest into the zip-lock bag at 2-8℃ immediately.

9.2.3 The diluted wash solution should be brought to room temperature before use.

9.2.4 Number: Number every microwell position and all standards and samples should be run in duplicate. Record the standards and samples positions.

9.2.5 Add standard /sample and antibody: Add 50µl of standard solution(kit component) or prepared sample to corresponding wells. Add 50µl of antibody solution(kit component, The antibody solution should be stored at 4℃, which will be used immediately after taking out), mix gently by shaking the plate manually and incubate for 60min at 0-4℃ with cover (or in dark place).

9.2.6 Wash: Remove the cover gently and pour the liquid out of the wells and rinse the microwells with 250µl of diluted wash solution (solution 3) at interval of 10s for 4-5 times. Absorb the residual water with absorbent paper (the rest air bubble can be eliminated with unused tip).

9.2.7 Add enzyme conjugate: Add 100µl of enzyme conjugate(kit component) to each well, mix gently by shaking the plate manually and incubate for 30min at 25℃ with cover. Take out and wash the plate again following 

9.2.8 Coloration: Add 50µl of solution A(kit component) and 50µl of solution B(kit component) to each well. Mix gently by shaking the plate manually and incubate for 30 min at 25℃ with cover(see 12.8).

9.2.9 Measure: Add 50µl of stop solution(kit component) to each well. Mix gently by shaking the plate manually and measure the absorbance at 450nm (It’s suggested measure with the dual-wavelength of 450/630nm. Read the result within 5min after addition of stop solution)

5. Sensitivity, accuracy and precision

Test Sensitivity: 0.05ppb

Detection limit

Honey…………………………………...………0.1ppb

Milk……………………………………………...………0.5ppb

Accuracy

Honey……………………………………...…...……100±15%

Milk……………………………………………...……100±15%

Precision

C.V. of the ELISA kit is less than 10%.